蛋白混合液通過層析柱時,與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)被吸附而滯留在層析柱中,沒有親和力的蛋白質(zhì)不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質(zhì)分開,然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘?,改變結(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來,從而達到分離提純的目的,這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱為親和層析。
免疫組化除正常的真實的陽性信號外常常會遇到不正常的背景著色,這些非正常的著色稱為“雜音”染色?!半s音”染色種類繁多,產(chǎn)生的原因也多種多樣,為了便于說明,遠慕將其歸納為下面幾種。
膠體金法是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),形成帶負電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱膠體金。
注意實驗室的標準化問題,注意污染的存在,同時嚴格按照說明書上的操作應(yīng)該沒有問題。發(fā)現(xiàn)DNA污染,用DNAse I消化1小時,37度離心取上清的時候,一定要小心不要取到中間的膜和下面的液體。
HEPES是一種非離子緩沖液,在pH 7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34 g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10~25 mmol/L。
斜面培養(yǎng)基(agarslantculture-medium):固體培養(yǎng)基(solid culture medium)的一種形式;制作時應(yīng)趁熱定量分裝于試管內(nèi),并凝固成斜面的稱為斜面培養(yǎng)基,用于菌種擴大轉(zhuǎn)管及菌種保藏。
傳統(tǒng)生物堿的分離方法主要有:浸漬、煎煮、溶劑回流、滲漉等,以及新開發(fā)的超臨界流體萃取技術(shù),微波輔助提取技術(shù),超聲輔助提取技術(shù),雙水相萃取技術(shù)等。
良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提。由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環(huán)節(jié),每一個步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的最終結(jié)果,因此,要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。