稀釋法測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)是一種評(píng)估抗菌劑抑制微生物生長能力的實(shí)驗(yàn)技術(shù),主要包括微量稀釋法和常量肉湯稀釋法兩種方法。瓊脂稀釋法具有操作簡(jiǎn)便、成本低廉、適合高通量篩選等優(yōu)勢(shì),尤其適合自動(dòng)化操作和精確控制藥物濃度。肉湯稀釋法直觀、易于操作,適合實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的測(cè)試,并且可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整藥物濃度和培養(yǎng)基體積。
雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)原理是利用雙熒光素酶作為熒光素酶的標(biāo)記來研究基因表達(dá)與調(diào)控的機(jī)制。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)是一種基因表達(dá)定量分析技術(shù),通過將雙熒光素酶Luciferase作為報(bào)告基因插入到需要研究的靶基因啟動(dòng)子區(qū)域或轉(zhuǎn)錄后區(qū)域,使其與靶基因協(xié)同表達(dá)。
細(xì)胞免疫熒光(Immunofluorescence,IF)是一種常用的技術(shù),用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)特定蛋白質(zhì)或其他分子的分布和表達(dá)情況。分析細(xì)胞免疫熒光的結(jié)果涉及多個(gè)步驟,包括圖像采集、圖像處理、定量分析和數(shù)據(jù)解釋。
菌種保藏(culture preservation,culture collection)是保持微生物菌株活力和遺傳性狀的關(guān)鍵技術(shù)。在分子生物學(xué)研究中,經(jīng)過基因編輯或改造的菌種通常非常珍貴且微量,因此需要進(jìn)行妥善的保藏。以下是具體的操作步驟:
在一無菌的Erlenmeyer或baffle瓶中,用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)液按I1:100的比例稀釋過夜培養(yǎng)物,燒瓶的體積應(yīng)該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。如果不搖動(dòng)培養(yǎng),所用燒瓶的體積應(yīng)比培養(yǎng)液體積大20倍以上,以確保足夠的通氣。
培養(yǎng)條件和方法;應(yīng)說明細(xì)胞系(或株)適應(yīng)的生存環(huán)境,即指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及適宜PH值。
具酸或堿性基團(tuán)的有機(jī)物質(zhì),在不同ph值時(shí),其結(jié)構(gòu)可能發(fā)生變化,因而熒光強(qiáng)度將發(fā)生改變;對(duì)無機(jī)熒光物質(zhì),因ph值會(huì)影響其穩(wěn)定性,因而也可使其熒光強(qiáng)度發(fā)生改變。
在進(jìn)行這些實(shí)驗(yàn)之前,建議仔細(xì)閱讀相關(guān)文獻(xiàn)、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,并進(jìn)行必要的質(zhì)控步驟,以確保獲得高質(zhì)量的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
細(xì)胞凋亡(Apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài),由凋亡小體和Caspases介導(dǎo)的細(xì)胞程序性死亡過程。
固定液的種類很多,用時(shí)可查閱制片方面的書籍。首先要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,選用固定液。但應(yīng)用時(shí)必須首先了解各種混合固定液中的組成成分能否預(yù)先混合,固定后是否需要洗滌,然后再開始配制固定液。